蛋白A纯化预装柱,5ML上海翊圣生物科技有限公司

性能参数

产品名称: 蛋白A纯化预装柱,5ML
英文名称: Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML
产品型号: 36410ES08
产品规格: 5ml
产品产地: Yeasen
品牌商标: Yeasen
价    格: 1848.00元
更新时间: 2017/5/22 12:01:31
浏览人数:1662
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产品详细描述

Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML

蛋白A纯化预装柱,5ML

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白A纯化预装柱,5ML

36410ES08

5ml

4

1848.00

Protein A 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白A纯化预装柱,5ML

36410ES25

5×5ml

4

6838.00

产品描述

天然蛋白AProtein A是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,结合大多数哺乳动物的IgG可用于多种抗体(单抗和多抗)的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上,ProteinA Protein G结合性能不太一样(详见附录1)。

本品使用的是基因改造后的蛋白A,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合,Protein A Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质,重组Protein A为配基,具有很高的物理化学稳定性,可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化,适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

本品Protein A 4FF Chromatography Column,5ml是一种装填了Protein A Agarose Resin 4FF的中压预装柱,规格5ml,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

产品性质

基质(Matrix

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand

重组蛋白A

孔径(Bead size

45-165µm

最大流速(Flowmax

0.3MPa,3bar

储存缓冲液(Buffer

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity

40mg human IgG/ml 基质

pH范围(pH range

3-12

运输与保存方法

冰袋运输。4保存,2年有效。

需准备试剂

【注】:建议以下缓冲液在使用前用0.22μm0.45μm滤膜过滤。

结合/洗杂缓冲液:0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0

洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1M Tris-HCl,pH 8.5

 

 

 


使用方法

【注】:上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

1样品纯化(以Akta系统为例)

1准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

2清洗3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

4上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1-5ml/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

【注】:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5洗杂:10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

6洗脱:用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

7清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

2 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

3 树脂清洗

随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

1)去除沉淀或变性物质

2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗;

5倍柱体积的PBSpH 7.4 清洗。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗;

5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗

注意事项

1)请勿冷冻保存本产品。

2)所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

附录1. 蛋白A,G对不同物种Ig的结合能力总表

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G 

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G 

Human IgG

++++

++++

Mouse IgG

++++

++++

Human IgG1

++++

++++

Mouse IgG1

+

++++

Human IgG2

++++

++++

Mouse IgG2a

++++

++++

Human IgG3

+

++++

Mouse IgG2b

+++

+++

Human IgG4

++++

++++

Mouse IgG3

++

+++

Human IgM

Use anti-Human IgM

Mouse IgM

Use anti-Mouse IgM

Human IgE

NR

NR

Chicken IgG (IgY)

NR

NR

Human IgA

+

NR

Cow IgG

++

++++

Human IgA1

+

NR

Goat IgG

+

++++

Human IgA2

+

NR

Goat IgG1

+

++++

Human IgD

Use anti-Human IgD

Goat IgG2

++++

++++

Rat IgG

+

++

Goat IgM

NR

NR

Rat IgG1

NR

+

Guinea Pig IgG

++++

++

Rat IgG2a

NR

++++

Guinea Pig IgG1

++++

++

Rat IgG2b

NR

+

Guinea Pig IgG2

++++

++

Rat IgG3

+

++

Hamster IgG

+

++

Sheep IgG

+

++

Horse IgG

+

++++

Sheep IgG1

+

++

Rabbit IgG

++++

+++

Sheep IgG2

+

++

Rabbit IgM

NR

NR

Sheep IgM

NR

NR

Rabbit All isotypes

+++

++

Pig IgG

+++

+++

Monkey IgG

++++

++++

Cat IgG

++++

+

Donkey IgG

++

++++

Dog IgG

++++

+

 

 

 

(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;

 

 


附录2 常见问题与解答

问题

可能原因

推荐解决方法

柱子反压过高

填料被堵塞

清洗填料

裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用0.22µm/0.45µm滤膜过滤。

样品纯化过程中曲线不稳

样品或 buffer 中有气泡

赶出气泡

样品和buffer进行脱气

洗脱组分中没有目的蛋白

样品中抗体浓度太低

使用其抗原做配体的介质

抗体被降解

适当的提高洗脱pH

样品与Protein A结合力低

换用Protein GProtein A/G树脂纯化

回收率逐渐减低

上样量太多

减少上样量

柱子太脏,载量降低

清洗树脂

 

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